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氯霉素(chloramphenicol) 通过可逆地与50S亚基结合，阻断转肽酰酶的作用，干扰胺基酰-tRNA与50S亚基结合，从而使新肽链的形成受阻，抑制蛋白质合成。氯霉素对70S核糖体的结合是可逆的，被认为是抑菌性抗生素。其抗性机制为抗性基因(Cat) 特异性表达乙酰转移酶；可乙酰化抗生素，从而使其失活。
工作浓度：严紧型质粒为25 μg/ml；松弛型质粒为170 μg/ml。
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