助力霍乱检测
近日，武汉大学通报出现一例确诊霍乱病例，由于霍乱是甲级传染病，所以该病例引起了广泛关注。武汉市武昌区卫生健康局7月11日公布后续情况：患者经有效诊治病情已得到控制，症状也已消失。目前未发现新增病例。
然而一波未平、一波又起！
7月13日，在武汉洪山区白沙洲市场水产品中检出4份甲鱼样本霍乱弧菌阳性(O139群)。洪山区迅速启动应急响应，开展流调溯源、排查管控、环境采样、终末消杀等处置工作。值得欣慰的是本次检出的霍乱孤菌尚未引发人员感染。
在很多人的印象里，霍乱是一种古老且遥远的疾病。实际上在全球范围内，霍乱的威胁一直存在。对于霍乱，我们不必恐慌，但需要时刻警惕传染病风险。
霍乱弧菌
霍乱，是由霍乱弧菌引起的一种急性肠道传染病，以发病急、传播快、波及范围广为特征，为我国甲类传染病，也是国际检疫传染病。2018年，也门经历了历史上最严重的霍乱疫情，同时，非洲一些国家也创下了该病死亡率的最高记录。WHO专家估计，在世界范围内每年大约有130万至400万例霍乱，导致2.1-14.3万人死亡。
霍乱弧菌属于弧菌科，革兰氏阴性菌，菌体短小呈逗点状，有单鞭毛、菌毛，部分有荚膜。WHO腹泻控制中心根据霍乱弧菌的菌体抗原特异性、生物性状、致病性等不同，将其分为了3型，即O1 群霍乱弧菌、非 O1 群霍乱弧菌、不典型 O1 群霍乱弧菌。目前霍乱血清群已超过200种，其中只有血清群O1和O139可以引起霍乱。
霍乱第七次大流行
从有记载的霍乱暴发流行至今，霍乱已引起了七次世界大流行，且每次均从亚洲开始，再扩散到其它大陆并延续多年。
目前全球范围内正在经历第七次世界大流行，此次大流行由埃尔托生物型霍乱弧菌引起，始于1961年的印度尼西亚，随即传遍了东南亚及西太平洋海域的大多数国家和地区。1964年后，霍乱已经传播到了亚洲内陆国家和地区，1970年传入非洲和欧洲，1973年传入北美洲，1974年传入大洋洲，1991年传入拉丁美洲，从而遍及全球五大洲。
霍乱传播途径
患者及带菌者是霍乱的主要传染源，通过饮用或食用被霍乱弧菌污染的水或食物，接触霍乱病人、带菌者排泄物污染的手和物品以及食用经苍蝇污染过的食物等途径传播。
霍乱临床症状
根据《全国霍乱监测方案》，凡有腹泻症状，且粪便、呕吐物或肛拭子样品培养O1群或（和）O139群霍乱弧菌阳性者，可为实验室确诊病例。根据临床表现，霍乱病程大致可分为3期。
● 泻吐期
患者每日大便次数可达数次至十几次，粪便的性状也会变成水样便，同时可能喷射性呕吐。
● 脱水期
由于剧烈腹泻及呕吐，患者体内水分和电解质丢失严重。此时血容量下降可导致循环衰竭，患者有休克死亡风险。
● 恢复期
纠正脱水后，大多数患者症状消失，逐渐恢复正常。部分患者可出现发热性反应，一般持续1-3天后自行消退。
霍乱检测方法
目前用于霍乱弧菌检测的方法主要有微生物学方法、分子生物学方法和免疫学方法，与微生物学方法相比，分子生物学方法应用越来越广泛。
● 微生物学检测方法
● 分子生物学检测方法
● 免疫学检测方法
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核酸检测
适用于以DNA为模板的LAMP扩增反应，扩增能力强、特异性高，在荧光定量法（染料法、探针法）LAMP反应中具有良好的反应性能。
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• 操作可视化：扩增结果可通过肉眼观察进行判读；
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扩增灵敏度高
以不同浓度的番鸭细小病毒（MDPV）质粒为模板，使用TransGen产品进行LAMP扩增。结果表明，TransGen产品扩增灵敏性高，特异性好，检出限可达fg级别。
注：1*102 copies浓度为fg级别
扩增速率快
在同等模板浓度条件下，分别使用TransGen产品和Company N产品进行LAMP扩增。结果表明，TransGen产品扩增速率更快。
反应可视化
以非洲猪瘟病毒（ASFV）p72基因质粒为模板，使用TransGen产品进行浊度法、HNB、中性红显色法LAMP扩增检测，63 ℃反应30 min。结果表明TransGen产品可进行可视化操作，扩增结果均可通过肉眼观察进行判读。
PerfectStart® II Probe qPCR SuperMix UDG (AQ712)
在PCR体系中加入荧光探针，通过检测荧光信号测定样本核酸量，其组分中含有PerfectStart® Taq热启动酶及特殊优化的反应缓冲液，可更加高效、精准完成qPCR检测。
• 3种抗体封闭，特异性高，灵敏度高，扩增效率高；
• 特殊优化的qPCR反应缓冲液，可提供更高的灵敏度和特异性；
• 使用UDG酶和dUTP，有效防止PCR产物污染，数据准确；
• 适用范围广，已成功用于非洲猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、哈维氏弧菌、虾肝肠胞虫和副溶血性弧菌等检测；
• 稳定性好，在反复冻融、预混液、常温、37℃等条件下保存，均可稳定扩增。
多重PCR检测
以牛病毒性腹泻病毒（BVDV）cDNA、猪蓝耳病病毒（PRRSV）cDNA、非洲猪瘟病毒（ASFV）质粒、伪狂犬病病毒（PRV）gDNA混合物为模板，进行qPCR检测。结果表明，TransGen产品可进行4重检测。
高灵敏度、高扩增效率
分别以不同浓度猪蓝耳病病毒（PRRSV）（10 pg、0.1 pg、0.01 pg）和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）（100 pg、1 pg、0.1 pg）的cDNA为模板，使用TransGen、Company V、Company T产品进行qPCR检测。结果表明，TransGen产品灵敏度可达0.1 pg，扩增效果优于Company V与Company T。
稳定性好
批次稳定性
使用不同批次的TransGen产品进行单重和四重qPCR检测。结果表明，TransGen产品可保障稳定的批次重复性。
冻融稳定性
使用0、5、10、15、20次反复冻融保存处理后的TransGen产品进行单重和四重qPCR检测。结果表明，反复冻融后TransGen产品性能不受影响，仍可稳定扩增。
预混稳定性
将一重、二重和三重检测基因的引物探针与TransGen产品进行预混，并在不同温度保存7天后进行qPCR检测。结果表明，TransGen预混液在不同温度保存后仍可稳定扩增。
参考文献
1.Diagnostic techniques for rapid detection of Vibrio cholerae O1/O139[J]. Vaccine,2020.
2.Epidemiology of cholera[J]. Vaccine,2020.
3.Epidemiology, Genetics, and Ecology of ToxigenicVibrio cholerae[J]. Microbiology and Molecular Biology Reviews,1998.
4.Molecular Ecology of Toxigenic Vibrio cholerae[J]. Microbiology and immunology, 2002.
5.Integrated view of Vibrio cholerae in the Americas[J]. Science, 2017.
6.Detection, Isolation, and Identification of Vibrio cholerae from the Environment[J]. Current protocols in Microbiology, 2012.
7.CTXφ Infection of Vibrio cholerae Requires the tolQRA Gene Products[J], Journal of bacteriology, 2000.
8.Environmental reservoirs and mechanisms of persistence of Vibrio cholerae[J], Frontiers in Microbiology, 2013.
9.吴诗品. 霍乱: 不该被遗忘的老瘟疫 [J]. 新发传染病电子杂志，2018.
10. 《全国霍乱监测方案》（2017）.
11.霍乱弧菌检测技术研究进展[J]. 微生物学报，2019.
