助力猴痘病毒检测
5月出现的猴痘疫情，来势汹汹。世卫组织5月26日表示猴痘病毒已经蔓延到20多个国家，在猴痘通常传播的中非和西非国家之外，发现了大约200例确诊病例和100多例疑似病例。但与新冠病毒不同，人类对猴痘、天花等痘病毒有更多的了解，可以迅速的采取措施阻断传播，专家认为猴痘不大可能成为全球流行性疾病。
猴痘病毒病原学
猴痘属于痘病毒科、脊索病毒亚科、正痘病毒属[1]。病毒颗粒较大（200-250 nm），痘病毒呈砖状，周围有脂蛋白包膜，内含线性双链DNA基因组[2-3]。目前，猴痘病毒有两大分支，分别是刚果盆地（中非）分支和西非分支，本次非流行国家部分病例病毒测序结果为西非分支[4]。
猴痘病毒（见彩色透射电子显微照片），来源：UK Health Security Agency/Science Photo Library
猴痘病毒的流行病学
猴痘是一种人畜共患病，1958年首次在圈养猴子身上发现因此被命名为猴痘病毒，现有数据表明非洲啮齿动物是其天然宿主，曾引起过松鼠、大鼠、小鼠、猴子、土拨鼠和人的感染[4-5]。1970年从刚果民主共和国一名怀疑患有天花的儿童身上分离出来猴痘病毒，确诊第一例人类病例[6]。自从猴痘病毒被发现后，非洲以外的地区也发生了人类感染猴痘病毒的散发性集群病例[7-12]。并在近期，已有多个国家报道发现猴痘确诊病例。
· 2003年，从加纳进口的冈比亚巨鼠感染了土拨鼠进而导致53例人类猴痘病例。
· 2018-2021年，共有5起发生在有尼日利亚旅居史的人感染猴痘病例的报道。
· 2022年5月26日，世卫组织表示猴痘病毒已经蔓延到20多个国家。
猴痘病毒传播途径和风险
猴痘病毒也可通过密切接触了感染者或者感染动物的呼吸道分泌物、皮肤或粘膜损伤、血液、体液或最近被病人体液或病变材料污染的物品而造成人际间传播[13]。此外，猴痘病毒还可经由母婴传播和性传播。
猴痘病毒感染的临床症状
猴痘病毒感染症状与天花相似，但临床严重程度较轻，潜伏期通常为5至21天，以全身性的发热、头痛、肌肉酸痛或淋巴结肿大，皮肤性的丘疹、水疱或者脓疱，以及并发其他病原微生物感染等症状为主，持续时间为2-5周[14]。
猴痘病毒与天花病毒的异同
自从20世纪70年代一场与天花密切相关的病毒的根除运动结束以来，科学家们一直在关注猴痘，发现在天花根除后的每一年，对这些病毒免疫力减弱或没有免疫力的人群都在增加。
猴痘与天花的相同点：
· 近亲，同属于正痘病毒属。
· 抗原性、生物学特性、形态、结构等方面十分相似。
· 典型症状临床表现相似。
猴痘与天花的不同点：
· 感染对象不同：猴痘感染人类和动物，天花仅能感染人类。
· 传播方式不同：猴痘可发生动物传人、人传人，天花只在人和人之间传播。
· 致死率不同：猴痘致死率为1%-10%，天花致死率约30%。
· 潜伏期不同：猴痘的潜伏期为6-16天，也可能在5-21天，天花的潜伏期为7-17天。
· 猴痘人际间传播效率远低于天花，症状明显轻于天花。
猴痘病毒颗粒，来源：英国《新科学家》杂志网站 天花病毒颗粒，来源：中国《显微镜下的疾病与药物》
严防输入
尽管欧洲猴痘感染人数可能进一步增加，但流行病学家认为，欧洲猴痘疫情不太可能发展成全球流行病。而且，世卫组织数据显示，天花疫苗对猴痘病毒的有效性高达85%。目前，我国还从未报道过发现猴痘确诊病例，也没有在动物宿主中发现该病毒，目前的重点是外防输入。中国疾控中心病毒病预防控制所研究人员表示“猴痘和天花虽有诸多相似之处，但在临床致病性及感染传播特性方面，它们并不相同，猴痘成为天花那样的烈性传染病的可能性微乎其微”。
猴痘病毒检测方法
猴痘感染可通过病毒分离培养技术，或通过PCR技术从猴痘患者皮损标本中检测出猴痘基因组DNA片段来确认，也可通过电子显微镜观察、正痘病毒抗原的免疫组织化学染色、抗正痘病毒IgM(表明最近接触)和IgG(表明以前接触或接种)的血清研究进行检测[15]。此外，如患者存在近期到流行地区的旅居史、接触从流行地区进口的野生动物、接触受感染的动物或人，这些线索均有助于建立鉴别诊断。
目前，我国已建立起多种早期猴痘病毒检测的技术，如qPCR技术，可在短时间内对痘病毒做出早期筛查诊断，结合新一代测序方法可对猴痘病毒的来源与传播链进行分子溯源。
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· 适用范围广，已成功用于非洲猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、哈维氏弧菌、虾肝肠胞虫和副溶血性弧菌等检测；
· 稳定性好，在反复冻融、预混液、常温、37℃等条件下保存，均可稳定扩增。
实验数据：
多重PCR检测
以牛病毒性腹泻病毒（BVDV）cDNA、猪蓝耳病病毒（PRRSV）cDNA、非洲猪瘟病毒（ASFV）质粒、伪狂犬病病毒（PRV）gDNA混合物为模板，进行qPCR检测。结果表明，TransGen产品可进行4重检测。
高灵敏度、高扩增效率
分别以不同浓度猪蓝耳病病毒（PRRSV）cDNA（10 pg、0.1 pg、0.01 pg）为模板，使用TransGen、Company V、Company T产品进行qPCR检测。结果表明，TransGen产品灵敏度可达0.1 pg，扩增效果优于Company V与Company T。
分别以不同浓度牛病毒性腹泻病毒（BVDV）cDNA（100 pg、1 pg、0.1 pg）为模板，使用TransGen、Company V、Company T产品进行qPCR检测。结果表明，TransGen产品灵敏度可达0.1 pg，扩增效果优于Company V与Company T。
适用范围广
TranGen产品可成功对不同浓度（107 copies/ml-104 copies/ml，10倍稀释）的哈维氏弧菌、虾肝肠胞虫和副溶血性弧菌DNA进行检测。
稳定性好
批次稳定性（单重）
使用不同批次的TransGen产品进行单重qPCR检测。结果表明，TransGen产品可保障稳定的批次重复性。
批次稳定性（四重）
使用不同批次的TransGen产品进行四重qPCR检测。结果表明，TransGen产品可保障稳定的批次重复性。
冻融稳定性（单重）
使用0、5、10、15、20次反复冻融保存处理后的TransGen产品进行单重qPCR检测。结果表明，反复冻融后TransGen产品性能不受影响，仍可稳定扩增。
冻融稳定性（四重）
使用0、5、10、15、20次反复冻融保存处理后的TransGen产品进行四重qPCR检测。结果表明，反复冻融后TransGen产品性能不受影响，仍可稳定扩增。
预混稳定性（单重）
将单重检测基因的引物探针与TransGen产品进行预混，并在不同温度处理7天后进行qPCR检测。结果表明，TransGen预混液在不同温度保存后仍可稳定扩增。
预混稳定性（双重）
将双重检测基因的引物探针与TransGen产品进行预混，并在不同温度保存7天后进行qPCR检测。结果表明，TransGen预混液在不同温度保存后仍可稳定扩增。
预混稳定性（三重）
将三重检测基因的引物探针与TransGen产品进行预混，并在不同温度保存7天后进行qPCR检测。结果表明，TransGen预混液在不同温度保存后仍可稳定扩增。
参考文献
[1] Monkeypox. Marlyn Moore; Farah Zahra.Update May 22, 2022.
[2] Monkeypox Virus in Nigeria: Infection Biology, Epidemiology, and Evolution. Viruses. 2020.
[3] Genomic variability of monkeypox virus among humans, Democratic Republic of the Congo. Emerg Infect Dis. 2014.
[4] 猴痘诊疗指南.2022.
[5] Monkeypox. Wkly Epidemiol Rec. 2011.
[6] A human infection caused by monkeypox virus in Basankusu Territory, Democratic Republic of the Congo. Bull World Health Organ. 1972.
[7] Update: multistate outbreak of monkeypox--Illinois, Indiana, Kansas, Missouri, Ohio, and Wisconsin, 2003. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2003.
[8] Diagnosis of Imported Monkeypox, Israel, 2018. Emerg Infect Dis. 2019.
[9] Imported Monkeypox, Singapore. Emerg Infect Dis. 2020.
[10] Family cluster of three cases of monkeypox imported from Nigeria to the United Kingdom, May 2021. Euro Surveill. 2021.
[11] Monkeypox in a Traveler Returning from Nigeria - Dallas, Texas, July 2021. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2022.
[12] Imported Monkeypox from International Traveler, Maryland, USA, 2021. Emerg Infect Dis. 2022.
[13] Modelling human-to-human transmission of monkeypox. Bull World Health Organ. 2020.
[14] Human Monkeypox: Epidemiologic and Clinical Characteristics, Diagnosis, and Prevention. Infect Dis Clin North Am. 2019.
[15] Human monkeypox. Clin Infect Dis. 2014.
